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文久3年6月、壬生浪士組の編成が京都守護職に提出された。
この頃の局長は3人体制で、幹部は近藤派と芹沢派の混成であるが、筆頭局長は芹沢であった。
| 局長 | 芹沢 鴨 |
| 近藤 勇 | |
| 新見 錦 | |
| 副長 | 山南 敬助 |
| 土方 歳三 | |
| 助勤 | 沖田 総司 |
| 永倉 新八 | |
| 原田 左之助 | |
| 藤堂 平助 | |
| 井上 源三郎 | |
| 平山 五郎 | |
| 野口 健司 | |
| 平間 重助 | |
| 斉藤 一 | |
| 尾形 俊太郎 | |
| 山崎 蒸 | |
| 谷 三十郎 | |
| 松原 忠司 | |
| 安藤 早太郎 | |
| 調役並監察 | 島田 魁 |
| 川島 勝司 | |
| 林 信太郎 | |
| 勘定役並小荷駄方 | 岸島 芳太郎 |
| 尾関 弥兵衛 | |
| 河合 耆三郎 | |
| 酒井 兵庫 |
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